低音提琴定弦方法复杂。目前通用的是四弦四度定弦:从高到低G,D,A,E。这样的定弦中,低音提琴能演奏的最低音为Kontra E。为了求得最低音与大提琴的八度关系,欧美的交响乐队都力争至少将低音提琴的最低音扩展至Kontra C。
低音提琴的定弦方法
 
  具体而言,有两种方法可以做到:
 
  流行于德奥等地的方法为增加第五弦。第五弦早期为C弦,这样第五弦与第四弦构成大三度,在指法上颇有不便,但C弦发音较易,张力上的要求在早期技术水准上容易达到。随着技术发展,德奥等地使用的第五弦一般为B弦,与第四弦构成纯四度,指法便利。弦的张力问题通过制琴技术发展也已解决。
 
  流行于其他国家的方法是,为第四弦增加变调器,使在常规上发空弦E音的第四弦,经过变调后发C音。
 
  除此以外,早期的低音提琴尚有3弦五度定弦法(一度流行与意大利等地的独奏低音提琴家)、3弦4度定弦法等等,今已淘汰。今日有少数低音提琴家主张4弦5度定弦(ADGC)。由于这种定弦要求演奏者的手足够大,且对传统的低音提琴指法、把位体系有彻底改动,因此尚未流行开。